ELISA的操縱因固相載體的形成不同而有所差異，海內(nèi)醫(yī)學(xué)檢修一般均用板式點(diǎn)。除特殊情況外，在醫(yī)學(xué)檢修中均以血清作為檢測標(biāo)本。加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物用液時(shí)可用定量多道加液器，使加液過程迅速完成。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴，以發(fā)生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。的試劑，良好的儀器和準(zhǔn)確的操縱是保證ELISA試劑盒檢測結(jié)果正確可靠的必要條件。ELISA頂用的蒸餾 水或去離子水，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測定(如血清 、尿液)，有些則需經(jīng)預(yù)處理(如糞便和某些分泌物)。

    在ELISA中一般有3次加樣步聚，即加標(biāo)本，加酶結(jié)合物，加底物。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下倒置混和，不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑，而血清標(biāo)本只要待血清天然凝固、血塊收縮后即可取得。也可在板孔中加入稀釋液，再在其加入血清標(biāo)本，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。一般說來，在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃，超過一周測定的需低溫冰存。可用作ELISA測定的標(biāo)本十分廣泛，體液(如血清 )、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標(biāo)本以測定其中某種抗體 或抗原成份，ELISA試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保留。